宿主細(xì)胞蛋白（HCPs）對(duì)重組蛋白藥物的穩(wěn)定性、安全性和療效具有負(fù)面影響。因此，確保最終藥物的純度和純化工藝的一致性至關(guān)重要，需使用合格且具有廣泛反應(yīng)的HCP ELISA試劑盒。HCP ELISA檢測(cè)試劑盒必須滿足兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，即具有廣泛的反應(yīng)性，并且通過方法學(xué)驗(yàn)證。Cygnus HCP ELISA試劑盒是行業(yè)的金標(biāo)準(zhǔn)，以下內(nèi)容詳細(xì)介紹了Cygnus HCP ELISA試劑盒的正確實(shí)驗(yàn)操作與方法學(xué)驗(yàn)證流程，幫您高效掌握實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵。

正確的洗板操作對(duì)于降低ELISA實(shí)驗(yàn)中的變異和消除背景干擾至關(guān)重要。如果您正在使用自動(dòng)化洗板設(shè)備或?qū)嶒?yàn)結(jié)果的變異程度高于預(yù)期，希望以下文章能幫助您優(yōu)化實(shí)驗(yàn)流程，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果回歸正常。

如何用正確的洗板方法解決ELISA檢測(cè)結(jié)果漂移的問題？

HCP ELISA檢測(cè)方法必須要通過法規(guī)認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)方法（ICH或FDA指南等）進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，以確保其能夠產(chǎn)生準(zhǔn)確的結(jié)果。想要獲得準(zhǔn)確的HCP ELISA檢測(cè)結(jié)果，本質(zhì)上是要保證樣品中HCP的濃度高于試劑盒的定量下限（LOQ），同時(shí)HCP的檢測(cè)抗體還要處于過剩狀態(tài)，滿足這兩點(diǎn)就必須要對(duì)檢測(cè)樣品（過程樣品和最終的藥物原液）進(jìn)行稀釋線性驗(yàn)證。因此，稀釋線性（dilution linearity）是驗(yàn)證HCP ELISA方法特異性和準(zhǔn)確性的關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)之一。

HCP ELISA方法驗(yàn)證——稀釋線性dilution linearity

在ELISA試劑盒的使用過程中，確保結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要。為了有效識(shí)別樣品配方與試劑盒組分之間的兼容性，加標(biāo)回收這一關(guān)鍵驗(yàn)證試驗(yàn)顯得尤為重要。它不僅是評(píng)估ELISA試劑盒準(zhǔn)確性的重要工具，也是滿足法規(guī)和藥典（如ICH或FDA指南等）對(duì)商品化ELISA試劑盒方法學(xué)驗(yàn)證要求的可靠方式。

HCP ELISA方法驗(yàn)證——加標(biāo)回收（Spike & Recovery）

空白對(duì)照是指在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中設(shè)置的一種陰性對(duì)照，旨在監(jiān)測(cè)非特異性背景信號(hào)，并為基線吸光度值提供參考。在酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）中，通過引入空白對(duì)照，可以有效識(shí)別并扣除樣品讀數(shù)中的背景噪聲，從而提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。然而，在多分析物ELISA測(cè)定中，由于其固有的高背景信號(hào)特性，這種標(biāo)準(zhǔn)化方法可能并不適用。下文將詳細(xì)探討為何在Cygnus的ELISA測(cè)定中通常不建議使用空白對(duì)照。

使用Cygnus ELISA試劑盒該如何設(shè)置空白對(duì)照？

ELISA是各國藥典推薦的在生物制品中檢測(cè)殘留HCPs的方法，可以測(cè)定HCPs的總量。并且ELISA的操作簡(jiǎn)便，是經(jīng)典的免疫學(xué)檢測(cè)方法。但ELISA檢測(cè)HCPs也有方法的局限性，比如不能從ELISA的結(jié)果中知道樣品中有哪些HCPs，或者用于檢測(cè)的抗體與哪些HCPs發(fā)生了免疫反應(yīng)。因此，監(jiān)管部門要求在使用ELISA檢測(cè)過程中HCPs殘留含量時(shí)，不僅要通過方法學(xué)驗(yàn)證證明試劑盒的準(zhǔn)確度，精密度，靈敏度等，而且還需要證明使用的HCPs抗體有廣泛的反應(yīng)性，即HCPs抗體覆蓋率。通過AAE-MS方法來識(shí)別最終藥物中的高風(fēng)險(xiǎn)HCPs信息，進(jìn)而確保這些HCPs能夠被檢測(cè)到。在完成以上所有方法學(xué)驗(yàn)證步驟后，該免疫檢測(cè)方法就可用于過程樣品監(jiān)控和產(chǎn)品的批次放行。這個(gè)決策流程對(duì)于開發(fā)和驗(yàn)證通用型或工藝專屬型HCP ELISA方法很有幫助，它展示了如何將正交AAE和MS方法相結(jié)合，通過數(shù)據(jù)來決定哪種類型的檢測(cè)方法更適用于您的項(xiàng)目。

抗體親和提取(AAE?)：革新宿主細(xì)胞蛋白(HCPs)分析的新篇章