腺相關病毒 (AAV) 是基因治療中最廣泛使用的傳遞/遞轉機制。近年來，基于AAV病毒所開發的基因療法研發及臨床試驗注冊數量也呈指數級增長，也需要AAV病毒生產工藝及產能的不斷優化及擴展，從最早基于貼壁細胞工藝升級轉換到以懸浮為主的200-2000L反應體系。

Mirus Bio成立于1996年，在核酸遞送領域深耕多年，于2021年8月推出GMP級別TransIT-VirusGEN® GMP 轉染試劑，支持AAV及LV從科研到GMP商業化生產。不同于傳統基于單組分的轉染試劑(如陽離子聚合物聚乙烯亞胺，PEI)，Mirus Bio將專利的多聚物及脂質技術進行多重組合，形成多功能性的轉染方案，克服細胞遞轉過程中的多重阻礙，以實現更高效轉染和更低細胞毒性，從而大幅度提升多種血清型AAV病毒生產載量。去年7月底Mirus上市RevIT? AAV Enhancer，已證明在不同AAV血清型別中，可提高AAV病毒基因組滴度1.2-4.9倍，并且在一定程度改善了實心率。更重要的是，RevIT? AAV Enhancer不僅可以搭配Mirus TransIT-VirusGEN® GMP 轉染試劑，也適配于其他轉染試(如PEI等)，使得AAV生產上游成本的進一步降低成為可能，進而降低了基因治療單劑量成本。下圖展示了國內客戶前期測試反饋結果，測試包括了不同血清型別的質粒設計，適用于國內及國外品牌的轉染試劑、細胞及培養基體系，實現了1.5-4倍以上的AAV病毒滴度提升。

RevIT Enhancer在國內客戶不同AAV項目平臺上的測試反饋結果

隨著國內外客戶項目及管線推進，已有越來越多的客戶將TransIT-VirusGEN® 轉染試劑以及RevIT? AAV Enhancer從搖瓶階段線性放大至200L-500L反應器，并且已應用到處于臨床申報產品中。ReciBioPharm 與Mirus Bio合作， Chris Brown(工藝流程開發部門)在線上(鏈接)展示了TransIT-VirusGEN 和RevIT? AAV Enhancer數據結果，并且比較了所有測試規模(搖瓶&反應器)，反饋病毒滴度放大效果非常好，并且實心率也保持相同水平，在 50 升的生物反應器中，也有著40%以上實心率。Chris Brown表示“選擇用TransIT-VirusGEN 和RevIT? AAV Enhancer產品，是基于我們以往的測試數據，允許最大限度地提高 AAV 產量。產量的提高，單個50 升生物反應器可生產更多劑量，從而降低單位劑量的成本。”

更多的，Bridgebio在poster中分享了基于AAV5型別，使用TransIT-VirusGEN® 轉染試劑以及RevIT? AAV Enhancer從搖瓶線性放大至200L反應體系(125mL搖瓶→2L → 10L → 200L)，病毒滴度和實心率數據結果(圖1)。與原有工藝相比 (Process A：PEIPro轉染 + Expi293細胞/培養基)，替換成TransIT-VirusGEN® 轉染試劑后的工藝流程 (Process B：TransIT-VirusGEN® 轉染試劑 + Expi293細胞 + BalanCD培養基；Process C：TransIT-VirusGEN® 轉染試劑 + VP2.0細胞 + BalanCD培養基)均有著更高的病毒滴度(圖2)和更低的宿主DNA和質粒DNA殘留。

圖1. 從125mL搖瓶線性放大至200L反應體系的病毒滴度和實心率數據結果

圖2. 采用Mirus的工藝平臺均有著更高的病毒滴度

Mirus Bio 并沒有止步于此，并于2024年10月7日重磅推出 TransIT®-AAViator AAV轉染試劑。繼續沿用Mirus Bio 多聚物及脂質兩組分的經典組合，不同的是應用逆向工程思維，基于現有RevIT? AAV Enhancer，從Mirus Bio多聚物及脂質庫中，分別篩選出更優化的脂質和聚合物配方。新推出的TransIT®-AAViator轉染體系，進一步降低了 AAV工藝生產流程中所需質粒 DNA 和轉染試劑使用量，最大限度地提高不同AAV血清型滴度和實心率，從而提升 AAV生產工藝的總體生產效率。整合TransIT®-AAViator的AAV病毒上游生產工藝，無需通過細胞密度而調整試劑和質粒DNA加入量，并且實現了單個生物反應器的生產劑量的成倍增加，大幅度降低了單位劑量的成本，為基于AAV 病毒的基因治療開發提供了更優的解決方案。

產品詳情

• 產品名稱: TransIT®-AAViator Transfection System
• 上市日期：2024年10月7日
• 產品貨號: MIR 73750 / MIR 73745
• 產品組分：TransIT®-AAViator轉染試劑及RevIT? AAV增強子

Mirus Bio AAV病毒生產相關轉染試劑產品參數

* HDPE材質管/瓶

*只針對30 mL以及150 mL 規格試劑

**只針對150 mL 規格試劑

TransIT-AAViator®提升AAV生產效率&降低單劑量成本

生產劑量的成倍增加

隨著AAV病毒滴度的提升，單個反應器所允許生產劑量也成倍的增加，從而大幅度降低單劑量成本。

減少生產所需批次

提高AAV病毒生產總產量，減少每次生產的所需批次數量或擴大生物反應器規模才可滿足生產需求，緩解了由于產能不足等諸多限制。

減少質粒DNA用量

TransIT®-AAViator 轉染系統，降低了至少一半質粒 DNA使用量 ，同時仍可保持高水平的滴度和實心率，進一步降低了批次生產成本。

加快工藝開發進程

TransIT®-AAViator 轉染系統，只需較少實驗優化，即可獲得最佳結果，從而縮短了工藝開發時間，加快了產品上市速度。

TransIT®-AAViator有著更高滴度和實心率

使用不同的質粒設計(GFP基因-圖3；RPE65 基因-圖4)，平行比較TransIT®-AAViator 轉染系統與“Poly F”(Polyplus FectoVIR® 病毒轉染試劑)以及“Poly P” (Polyplus PEIpro®病毒轉染試劑)。實驗結果顯示，在不同AAV血清型別中 (AAV5、8、9)，TransIT®-AAViator 轉染系統有著更高的病毒滴度及實心率，當質粒設設計替換成治療性基因(RPE65 基因)，病毒滴度及實心率相比于競爭品牌，其優勢更加顯著。

圖3. 轉染GFP基因質粒的AAV滴度

圖4. 轉染RPE65基因質粒的AAV滴度

TransIT®-AAViator降低質粒DNA用量

TransIT®-AAViator轉染系統，在較低質粒 DNA 用量仍可得到高水平AAV病毒滴度及實心率（圖5）。

圖5. 實驗使用TransIT® -AAViator轉染試劑(試劑:DNA比例為1.25:1,vol:wt)，以 1:1:1 的質粒質量比轉染 pAAV-WPRE-GFP (Aldevron), pAAV-Helper (Aldevron) 和 pAAV-RepCap (AAV9 Genemedi)三質粒。轉染時加入RevIT AAV Enhancer（1 μl/mL），轉染后 72 小時使用化學裂解法收獲 AAV病毒。

TransIT-AAViator實驗流程

Step 1:  轉染前，需保證生長在培養基中的懸浮 HEK 293 細胞活率 > 95%。

Step 2: 轉染時：建議細胞密度為 ~ 3 × 10E6 cells/mL，TransIT®- AAViator 試劑與DNA 加入比例為1:1 - 1.5:1，每 1 mL 培養基加入RevIT AAV Enhancer 0.5 - 1.5 μl；靜止條件下孵育15-45 分鐘，以便形成轉染復合物，然后輕柔的加入細胞中。

Step 3: 轉染后無需更換培養基，一般可在轉染后 48-72 小時收獲AAV病毒。

客戶案例分享

最新線上webinar：Enhancing AAV Production: A Novel Transfection System for Cell and Gene Therapy Applications (鏈接)

演講者信息：

Webinar內容一覽：

通過該線上Webinar，可了解TransIT®-AAViator 轉染系統，包括了開發初衷、數據性能對比及展示等。來自Affinia Therapeutics 高級工藝開發 Michael White， 強調了該轉染系統的可擴展性和工作流程的易整合性，是想要優化上游工藝和增加整體成本效益的理想選擇。

此外，Michael White分享了 Affinia Therapeutics AAV轉染平臺體系納入TransIT®-AAViator 轉染系統經驗，強調該系統能夠降低質粒DNA用量，同時也在不同規模中進行了測試(搖瓶-3L反應器)，可穩定的保持高水平滴度，從而大幅度提高了生產工藝的效率，同時降低了AAV病毒生產成本。

討論重點包括：

• Affinia 比較了新一代轉染系統TransIT®-AAViator與當前使用的平臺工藝；
• Affinia 在將TransIT-AAViator® 與其他試劑性能進行比較中，如何優化使其性能顯著優于其他轉染試劑；
• 整合TransIT®-AAViator轉染系統，相比于優化前實現了3 倍滴度提升及 70% 實心率。

小結

新一代專為優化AAV 生產工藝而推出的轉染試劑: TransIT®-AAViator 轉染系統：

• 與基于單個組分(如PEI)轉染試劑不同，可顯著的提高不同AAV 血清型別的滴度及實心率；
• 有著更低轉染試劑及質粒DNA使用量需求，同時保持高水平的AAV滴度及實心率；
• 相比于競爭品牌(FectoVIR&PEIpro等)，有著更高基因組滴度及實心率，并且質粒設計為治療基因，其優勢更加顯著。

相關產品信息及鏈接

Mirus成立于1995年，始終秉承著為基因遞轉提供優化方法及高效的工具。憑借超過 25 年轉染領域的深根細作，獲得了多項技術突破，已成為核酸遞送領域的全球領導者和值得信賴的品牌。Mirus科學家團隊不斷突破轉染技術的極限，推出了VirusGEN®轉染試劑與RevIT?增強劑，進一步提升AAV/LV產量，助力推動生物治療藥物的降本增效，為CGT領域客戶賦能。

北京西美杰科技有限公司是Mirus中國區代理，始終秉承著專業、嚴謹的態度為客戶提供優質的產品與服務。如果您對上述產品感興趣，歡迎致電北京西美杰客服熱線400-050-4006或登錄網站www.hgqkl.cn了解更多產品信息。