藥典中核酸殘留限量規定

WHO和各國藥物注冊監管機構一般只允許生物制劑中存在100 pg/劑量以下的殘留DNA，特殊情況下不大于10ng/劑量。根據雜質來源和純化工藝的不同，一般酵母、大腸桿菌表達的生物制品中DNA殘留量不超過10ng/劑量，Vero和MDCK細胞表達的疫苗等生物制品中DNA殘留量不超過100pg/劑量或10pg/劑量（根據宿主細胞和給藥方式的不同，限量要求不同）。

DENARASE® 全能核酸酶

DENARASE®全能核酸酶是一款通過微生物發酵生產的基因工程非限制性核酸內切酶，其基因序列來自粘質沙雷菌（Serratia marcescens），生產菌株是一種安全級別為S1級且不含內毒素的革蘭氏陽性芽孢桿菌（Bacillus.sp.） ，大大降低了內毒素污染風險。DENARASE®是c-LEcta GmbH公司在歐盟、美國、中國、印度、日本和韓國的注冊商標（https://denarase.com/）。其擁有的自主專利生產工藝，完全采用非動物性原料，不添加抗生素，符合歐盟GMP生產標準，通過ISO9001:2015質量體系認證，核酸酶純度大于99%，酶活性高，且無蛋白酶活性，是生物制品生產工藝中常用全能核酸酶的典型代表。

DENARASE®全能核酸酶能夠降解所有形式的DNA和RNA，包括單鏈、雙鏈、線性、超螺旋和環狀DNA、RNA及基因組DNA，對核酸序列沒有特異性。在純化工藝中使用DENARASE®全能核酸酶，可有效降低細胞裂解液粘度，改善蛋白純化工藝，高效去除重組蛋白制品核酸污染，大幅降低終產品污染風險，滿足法規要求，在細胞治療、病毒載體疫苗等領域應用廣泛。DENARASE®全能核酸酶的DMF已經提交，目前正處于審核階段。

核酸酶活性的影響因素分析

DENARASE®全能核酸酶在廣泛的條件下仍有很強的生物酶活性，跟大多數生物酶一樣，核酸酶的活性也會隨溫度、pH值、Mg2+、緩沖體系和底物濃度等因素的改變而變化。為了更好的發揮核酸酶的活性，幫助使用者更快的摸索出適宜的反應條件，小編為各位提供一組對核酸酶活性影響較大的關鍵參數指標供參考。（數據來源于廠家驗證指導文件）

1 溫度

核酸酶適宜反應溫度為37℃。

2 pH值

不同緩沖體系結果顯示，適宜pH值范圍在8.0-9.0之間。

3 Mg2+

輔助因子Mg2+適宜濃度范圍是1-2mM，當增大Mg2+濃度時，酶活性會下降。

4 單價陽離子濃度

單價陽離子的存在會抑制核酸酶的活性，應控制Na+和K+的濃度在100mM以下。

5 消泡乳化劑

消泡乳化劑常被應用于工業生產的發酵液中，實驗結果顯示，4%的消泡乳化劑對核酸酶活性無明顯抑制作用。

6 緩沖系統

高濃度的緩沖體系會抑制核酸酶的活性，在Tris鹽酸緩沖體系中酶活性大于Tris磷酸鹽緩沖體系。隨著Tris磷酸鹽緩沖體系中磷酸鹽濃度的增加，酶活性降低，然而Mg2+離子濃度的增加會削弱其抑制作用。

DNA1 (standard):Sigma,D1626(salmon testes)

DNA2:Promega,D181A(herring sperm)

DNA3:GE Healthcare,27456501(200-6000 bps)

DNA4:Millipore,262015

7 底物種類及濃度

核酸酶對不同來源的DNA底物,降解的DNA片段長度不同，下圖為不同來源DNA底物，濃度在1mg/mL的結果。為了保持核酸酶的高活性，DNA底物濃度應不大于1mg/mL。

DENARASE®全能核酸酶產品信息

DENARASE® 全能核酸酶重要參數

c-LEcta GmbH公司為了確保DENARASE®全能核酸酶的穩定和高質量水平，每個批次試劑均滿足以下參數的內部驗收標準。

酶活: >250 U/μL

純度: ≥99%

比活度：＞6*105 U/mg

蛋白酶活性：無

內毒素：＜0.25EU/kU

總菌落數：＜250cfu/200μL

免費試用進行中

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